刘刚 唐山职业技术学院
乙型脑炎病毒(简称乙脑， JBEV)是由乙脑病毒导致的中枢神经系统损伤的急性传染性疾病， 蚊是传播媒介， 猪是扩散宿主， 夏秋季乙脑病毒在蚊 － 猪 －蚊之间循环。猪乙型脑炎能引起母猪繁殖障碍， 表现为妊娠母猪流产， 产死胎、 木乃伊胎、 弱仔等， 给养猪业带来巨大的经济损失。目前， 养猪场预防猪乙脑除了搞好饲养管理和加强检疫、 隔离、 消毒外， 最主要的预防措施是母猪配种前注射乙脑疫苗， 但临床上普遍采用的是猪日本乙型脑炎减毒活疫苗， 其免疫效果如何， 研究报道甚少。试验采用乳胶凝集试验(LAT)检测免疫前后血清抗体水平， 并以此评价猪乙型脑炎减毒活疫苗的免疫效果， 为临床预防该病提供参考。
1 材料
1． 1试验动物
选择某规模化种猪场繁殖母猪 40 头， 其中经产母猪 17 头， 后备母猪 23 头。经健康检查无病， 并接种猪瘟、 伪狂犬、 口蹄疫等疫苗， 常规饲养管理。
1． 2仪器和试剂
猪乙型脑炎减毒活疫苗， 40 头份/瓶;猪乙型脑炎乳胶凝集试验抗体检测试剂盒， 100 头份/盒;5 mL一次性真空负压采血管， 含促凝剂;离心机;移液管;载玻片等。
2 方法
2． 1疫苗接种
2013 年3 月20 日对计划免疫的40 头繁殖母猪，分别于配种前第 15 天常规接种猪乙型脑炎减毒活疫苗， 每头猪接种 1 头份。2． 2血样采集与处理
对 40 头试验猪分别于接种疫苗的第 0 天、 15天、 45 天， 采用真空采血器耳静脉采血， 标明采血猪的耳号。血样置室温 3 h， 待血液在负压采血管中充分凝固， 3 000 r/min 离心 20 min， 常规分离血清， 冰冻保存待检。
2． 3乳胶凝集试验
取待检血清、 阳性对照血清、 阴性对照血清、 稀释液各 1 滴(20 μL)， 分别置于洁净干燥的载玻片上。各加乳胶抗原滴(20 μL)， 搅拌均匀， 大小为 1 cm，并摇动 1 ～2 min， 于 3 ～5 min 内观察结果。
2． 4结果判定
凝集反应强度标准 :“+ + + + ” 全部乳胶凝集，颗粒聚于液滴边缘， 液体完全透明 ;“+ + + ” 大部分乳胶凝集， 颗粒明显， 液体稍混浊 ;“+ + ” 约 50% 乳胶凝集， 但颗粒较细， 液体较混浊 ;“+ ” 有少许凝集，液体呈混浊状 ;“－ ” 液滴呈原有的均匀乳状。判定标准:当阳性对照血清加抗原呈“++++ ”凝集、 阴性对照血清加抗原呈“－ ” 凝集、 抗原加稀释液呈 “－ ” 凝集时， 以呈现“+ + ” 及其以上凝集反应判为阳性。
3 结果
3． 1血清抗体凝集强度
对 40 头猪乳胶凝集试验检测猪乙型脑炎血清抗体结果， 免疫前仅 14 头猪的凝集强度达到“+ + ” 以上， 表明大多数猪血清抗体较低。免疫接种后第15 天， 35 头猪的凝集强度达到“+ + ” 以上， 表明大多数猪得到疫苗的保护。免疫接种后第 45 天， 仍有33 头猪的凝集强度达到“+ + ” 以上， 表明血清抗体维持时间较长， 可以维持一个繁殖季节。
3． 2血清抗体阳性率
根据乳胶凝集试验的判断标准， 经检测的 40 头母猪血清抗体阳性率结果见表 1。由表 1 可知:免疫前猪的血清抗体呈阴性的猪有26 头， 阴性率为 65． 0%， 其中经产母猪 14 头， 后备母猪 12 头;血清抗体呈阳性的猪有 14 头， 阳性率为35.0%， 其中经产母猪 3 头， 后备母猪 11 头。免疫后第 15 天猪的血清抗体呈显阴性的有 5 头， 阴性率为12． 5%， 其中经产母猪 3 头， 后备母猪 2 头;血清抗体呈阳性的有 35 头， 阳性率为 87． 5%， 其中经产母猪14 头， 后备母猪 21 头。免疫后第 45 天猪的血清抗体呈显阴性的有 7 头， 阴性率为 17． 5%， 其中经产母猪 4 头， 后备母猪 3 头;血清抗体呈阳性的有 33 头，阳性率为 82． 5%， 其中经产母猪 13 头， 后备母猪20 头。
4 讨论与分析
4． 1流行病学
乙脑属人畜共患的自然疫源性疾病， 可感染人、马、 猪、 牛、 羊、 鸡、 鸭、 野鸟。临床上可表现从急性感染到隐性感染。蚊是乙脑的传播媒介， 猪是扩散宿主， 夏秋季乙脑病毒在蚊 － 猪 － 蚊之间循环。
4． 2症状
猪体温突然升高达 40 ～41 ℃， 呈稽留热， 精神不振， 食欲不佳， 结膜潮红， 粪便干燥， 如球状， 附有黏液， 尿深黄色， 有的病例后肢呈轻度麻痹， 关节肿大，视力减弱， 乱冲乱撞， 最后后肢倒地而死。母猪、 妊娠新母猪感染乙脑病毒后无明显临床症状， 只有母猪流产或分娩时才发现产生死胎、 畸形胎或木乃伊胎等症状。公猪常发生睾丸炎， 多为单侧性， 少为双侧性的。初期睾丸肿胀， 触诊有热痛感， 数日后炎症消退， 睾丸逐渐萎缩变硬， 性欲减退， 并通过精液排出病毒， 精液品质下降， 失去配种能力而被淘汰。早产仔猪多为死胎， 大小不一， 黑褐色， 小的干缩而硬固， 中等大的茶褐色、 暗褐色。死胎和弱仔的主要病变是脑水肿、 皮下水肿、 胸腔积液、 腹水、 浆膜有出血点、 淋巴结充血、肝脏和脾脏有坏死灶、 脑膜和脊髓膜充血。出生后存活的仔猪高度衰弱， 并有震颤、 抽搐、 癫痫等神经症状， 剖检多见脑内水肿， 颅腔和脑室内脑脊液增量， 大脑皮层受压变薄， 皮下水肿， 体腔积液， 肝脏、 脾脏、 肾脏等器官可见有多发性坏死灶。
4． 3预防
乙脑疫苗预防接种是预防乙脑最有效、 最经济的措施， 而疫苗接种是否能够达到理想的效果， 关键在于疫苗的免疫原性和安全性。切实加强饲养管理， 提高猪群免疫水平， 才能防止本病流行。加强环境消毒、 灭蚊， 要做好圈舍及周围环境的清扫消毒工作。要做好畜禽舍环境的清扫工作， 要对所有圈舍进行一次全面消毒。
5 结论
1)乙脑弱毒疫苗免疫效果好， 几天就能达到预期的免疫效果， 具有良好的安全性和可靠性， 无任何毒副作用。
2)采用猪伪狂犬病乳胶疑集试验(LAT)诊断试剂盒检测疫苗对猪的免疫效果， 具有判定快速、 结果稳定、 操作简便等优点， 值得在广大基层推广。
